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摘 要 目 的:观察不孕患者血清asab及其外周血细胞培养上清液中ifn-γ 的水平变化,解asab与ifn-γ 的相关性,揭示asab,ifn-γ与不孕 的关系及致病机理. 方法:酶联免疫吸附法(enzymelinkedimmunosorbentassay,elisa)测定62例不孕患者及50例正常生育者血清asab,同时测定50例不孕患者与50例正常生育者外周血细胞培养上清液中γ-干扰素(interferon-γ,ifn-γ)水平. 结果:(1)不孕患者血清asab阳性率(29.03%)显著高于正常生育组(6.百%,p＜0.05＝;(2)外周血细胞培养上清液中ifn-γ水平,不孕组为(1.1百±0.459)μg/l,显著高于正常生育组(0.607±0.052)μg/l(p＜0.百1＝;(3)不孕患者外周血细胞培养上清液中ifn-γ水平,asab阳性组(1.308±0.345)μg/l,显著高于asab阴性组(0.836±0.265)μg/l(p＜0.百1＝;(4)不孕患者血清asab水平与培养上清液中ifn-γ水平呈显著正相关(r=0.8126,p＜0.百1＝. 结论:(1)asab是 与不孕有密切关系 的重要免疫因素;(2)不孕患者体内ifn-γ水平明显高于正常生育组,提示患者体内细胞免疫功能状态异常增强,异常升高 的ifn-γ可能通过影响机体生殖免疫功能而导致不孕;(3)不孕患者体内异常高水平 的ifn-γ与asab 的产生有着密切 的关系. 1954年,rümke发现抗精子抗体后,抗精子抗体成为研究生殖异常免疫因素 的焦点［1］,有关抗精子抗体 的生殖免疫作用及生殖免疫病理机制有详尽 的阐述. 对于不孕中细胞介导 的免疫反应(cellmed-iatedimmunity,cmi) 的病理机制 的研究及探讨鲜有报道. 随着先进 的生物化学技术与免疫技术 的建立与应用,能够系统地研究生殖异常免疫机制中潜[在] 的淋巴因子与单核因子 的作用,即细胞介导 的免疫作用. marcus曾发现有关精子抗原cmi反应,提出这 一免疫机制可能参与不孕 的发生［2］,随后anderson与hill[在]研究中发现细胞因子[在]习惯性流产及不孕 的病理机制中起重要作用［3-5］,这些有力地支持病理 的cmi参与生殖紊乱过程. 导致不孕 的因素很多,本研究为针对性研究免疫因素 的作用,筛选出 的不孕对象已排除生理解剖,生理功能,染色体异常及感染因素造成 的不孕. 本研究应用elisa法检测这类不孕患者及正常生育女性血清中抗精子抗体（asab）及其血细胞培养上清液中γ-干扰素（ifn-γ）水平,探讨asab,ifn-γ[在]不孕中 的机制及其相关性. 1 材料与方法 1.1 研究对象 1.1.1 病例选择标准 原发或者继发不孕,不孕期超过2年. 女方基础体温双相,黄体期不少于12d,连续3个周期b超监测,卵泡发育及排卵正常. 女方生殖系统无感染史. 女方妇科检查无器质性病变,子宫输卵管通液及造影正常. 配偶体检及精液常规正常,夫妇染色体数目,核型及显带正常. 1.1.2 正常对照组选择标准 女方月经及生育史正常. 女方妇科检查无器质性病变. 女方生殖系统无感染症状. 宫内节育器避孕. 1.1.3 分组 不孕组:62例,为婚后夫妻性生活正常,未避孕,2年或者2年以上不孕史,其中原发不孕52例,继发不孕10例,年龄22～34岁,平均26.53±2.57岁,不孕史2～10年,平均6年. (2)正常对照组:50例,月经及生育史正常,生殖系统无器质性病变及感染症状,育龄女性,年龄22～35岁,平均26.33+2.44岁. 1.2 方法 1.2.1 标本 筛选 的研究对象空腹肘静脉血4ml,取2ml待自然凝集后,3千r/min离心,取上层血清,-60℃贮存待测;另2ml经抗凝处理后,取0.5ml全血培养50h,3千r/min离心取上清液,-60℃贮存待测. 1.2.2 仪器.试剂 隔水式电热恒温培养箱;超低温冰箱;酶标仪;人γ-干扰素酶联检测试剂盒;抗精子抗体酶联免疫测定试剂盒;rpmi1640培养基. 1.2.3 结果计算及判定 (1)抗精子抗体:σ960型酶标仪测光密度(od)值,凡样品孔od值＞阴性对照孔2倍,即为阳性,否则为阴性. (2)γ-干扰素:σ960型酶标仪测od值,从标准曲线上查待测标本γ-干扰素浓度值. 1.2.4 统计学处理 两样本率比较采用χ2检验,正态性检验,方差齐性检验,成组设计 的两样本均数采用t检验,直线相关系数采用t检验. 2 结果 2.1 不孕组asab 的阳性率(29.03%)显著高于正常生育组(6%,p＜0.05,见表1). 表1 不孕组与正常生育组asab阳性率 的比较 tab.1 comparisonofasabpositiveratebetweeninfertilityandnormalpregnantgroup groupnpositivenegativepositiverate(%) infertility62184429.031) normalpregnant503476.百
note:1)p＜0.05,comparedwithnormalpregnantgroup2.2 不孕组外周血细胞培养上清液中ifn-γ 的水平为(1.1百±0.459)μg/l,正常生育组外周血细胞培养上清液中ifn-γ 的水平为(0.607±0.052)μg/l,不孕组ifn-γ水平显著高于正常生育组ifn-γ水平(p＜0.百1,). 2.3 不孕患者共50例进行外周血细胞培养,其中17例血清asab阳性,33例血清asab阴性,按血清asab阳性与否分为asab阳性组与asab阴性组. asab阳性组ifn-γ水平为(1.308±0.... 下一页