摘要：中国人民解放军第三军医大学附属新桥医院消化内科重庆市400037
项目负责人赵晓晏e-mail:xshhcx@sina.com
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收稿日期2001-03-12接受日期2001-03-18
主题词血小板活化因子；胰腺炎，急性坏死性/病因学；综......
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天气闷热加上气压低心脏病病人日子不好过
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感染性腹泻病原微生物的实验诊断山东大学医学院微生物学与免疫学教研室山东省济南市25百12
tel:百86-531-2942038 【关注焦点:
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项目负责人曹英林 【健康导读:
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收稿日期2百1-06-13接受日期2百1-06-25
主题词腹泻/微生物学;腹泻/诊断;感染/微生物学;感染/诊断;诊断技术与方法
曹英林.感染性腹泻病原微生物 的实验诊断.世界华人消化杂志,2百1;9(8):927-928
0引言感染性腹泻病是 一大类发病急.传播快.危害广 的常见传染病,其发病率[在]我国为传染病之首,因此快速.敏感.特异地诊断对于治疗与预防均具重要意义.能引起人类感染性腹泻 的病原微生物(infectiousdiarrhealpathogenicmicroorganisms,idpm)近50种,包括细菌.病毒.真菌与寄生虫四大类.它们种类繁多,结构与化学组成复杂,代谢产物复杂,核酸类型.基因与蛋白质 的表达特性也显著不同.利用这些物质 的结构与化学组成 的不同以及功能表达 的不同特征选择合适 的实验诊断技术方法是 十分必要 的,这就要求不仅对idpm 的生物学特性有所认识,还要对实验诊断技术 的技术特点.优缺点有较全面 的认识,从而选择适当 的实验技术.以检测 的对象而言,可分为两类检测方式: 一是 直接测定idpm本身所具有 的物质——蛋白质.糖.脂类.核酸.代谢产物与新表达物质(比如细菌.病毒与真菌 的表面结构分子.内部分子等);二是 检测由idpm感染刺激免疫细胞比如b细胞产生抗体.t细胞产生细胞因子等具结合特异性与功能特性 的活性分子,其中检测抗体最具诊断意义[1].另外检测idpm(比如病毒.某些细菌)感染 的组织或者培养细胞所表现 的形态.结构.表达等改变也有助于诊断.该两类检测形式中,以直接测定病原体本身 的结构与物质更直接.可靠,以单克隆抗体标记技术及其所衍生 的很多示踪标记技术[在]idpm诊断中有广泛应用(比如elisa).现就感染性腹泻 的病原微生物 的经典实验诊断方法与当代最新 的实验技术进展作简要介绍.
1致感染性腹泻 的病原微生物(idpm)[2,3]1.1细菌引起idpm 的细菌有痢疾杆菌.霍乱弧菌.大肠杆菌.沙门菌.空肠弯曲菌及新出现 的o139型霍乱.o157:h7大肠杆菌等.idpm细菌与表面结构抗原(鞭毛.菌毛.菌体成分).抗原成分.生化反应及血清学反应十分复杂,但仍是 临床检测 的常规实验,20世纪80年代后抗体标记技术(比如elisa).pcr技术 的广泛应用,以及分子生物学技术(比如dna测序.southernblot杂交)与自动化检测分析系统 的引进与开展,提高实验检测 的水平.
1.2病毒致感染性腹泻 的病毒包括轮状病毒.腺病毒.诺瓦克病毒以及aids病并发感染性腹泻等[4].病毒是 病原微生物中体积最小.结构简单(核心为dna或者rna,外壳由蛋白质包裹).必须[在]活细胞内寄生,能使宿主细胞表达病毒编码 的新分子(抗原)或者组织结构改变生命体.病毒 的感染使机体产生相应抗体,这都为测定病毒 的感染提供条件,可选择中与实验.elisa.核酸分型.免疫组化.dna分子杂交与pcr等.近几年对常见病毒 的感染均可用pcr或者rt-pcr作出定性诊断.
1.3真菌常见idpm病原性真菌为白色念珠菌.曲霉菌.毛霉菌.组织胞浆菌等.真菌 的形态学检查(直接镜检.染色.培养)及病理学特征具有诊断意义.免疫学检测诊断价值不大.
1.4寄生虫引起腹泻 的寄生虫有50多种,以阿米巴.贾第虫.隐孢子虫.结肠小袋纤毛虫等以及aids并发真菌感染为常见[5].目前多采用pcr,mab检测,提高阳性诊断率.
2经典 的idpm实验诊断[6]尽管idpm 的种类繁多.其结构与化学组成.生命活动以及与宿主细胞相互关系较为复杂,但是 诊断鉴定 的基本策略是 测定核酸与蛋白质,因它们是 生命活动 的核心物质,它们 的排列顺序.空间结构与功能决定着生命体 的属.种.类.型.株等生物学特性,因此检测核酸与蛋白质(包括酶)仍是 idpm实验诊断 的基本物质,dna→rna→蛋白质 的流向与密切关系也使得检测.分析核酸与蛋白质 的领域成为产生突破性技术 的摇篮.有关idpm 的实验诊断技术,大体分为两类:经典 的技术方法与当代 的实验技术方法.经典技术方法包括:①细菌 的培养分离;②形态结构;③生化反应;④血清学试验;⑤抗体标记技术;⑥中与试验;⑦免疫组化;⑧pcr与rt-pcr;⑨某些分子生物学技术(核酸电泳.蛋白质双向电泳.蛋白质纯化技术.relp,g+cmol%,southern斑点杂交.dna测序等).20世纪90年代后,生物科学技术.信息科学技术 的飞速发展已跨入新技术时代,产生具革命性 的新技术.当代最新 的实验技术.包括①生物芯片技术(biochip,包括dna芯片与蛋白质芯片);②t7核糖核酸聚合酶放大 的免疫检测系统(idat,immuno-detectionamplifiedbyt7rnapolymerase);③选择性捕获转录序列 的分析系统(scots,selectivecaptureoftranscribedsepuence)[7,8].根据疾病.病程采取相应标本材料(比如血.粪便.腹泻物等),阳性检出率[在]70%～95%.
2.1细菌 的培养染色选择合适 的培养基(比如选择培养基.增菌培养基.特殊培养基.厌氧培养基等)培养分离.初步鉴定与药敏试验都应按常规进行.严格 的病原学诊断应确定到种.型.甚至株.标本采集要求停用抗生素3d后施行.致病菌 的阳性分离率[在]80%～1百%.细菌 的染色以gram染色法最常用.最实用,具有鉴定意义.可针对病原菌不同选用giemsa,genta,银染色与he染色法等.染色法可信度达86%～96%,总体敏感度[在]90%以上,细菌量多时阳性检出率可达1百%.
2.2生化反应检测idpm 的生化反应十分复杂.常用 的生化反应试验方法有60多种.多数生化反应试剂.配方与方法都已标准化.商品化,使用也颇方便.目前idpm 的生化反应仍是 鉴定.分类 的基本依据,要结合免疫学检测结果综合判断.生化反应法 的局限性是 复杂性与交叉反应性,通常鉴定到型要做10种以上 的生化反应,因而较繁锁.90年代后已有自动化 的生化反应分析系统——微生物数码分类鉴定系统,比如api系列已用于肠杆菌科.弯曲菌属.葡萄球菌 的分析鉴定[8].此结果可靠.可自动化.
2.3免疫学实验诊断免疫学诊断通常指血清学诊断与抗体标记技术.血清学实验诊断常用 的是 凝集反应.沉淀反应.补体结合反应.中与试验.血凝与血凝抑制试验,以及应用最普遍 的elisa.荧光菌球.免疫荧光等.近几年国内已有自动化抗原抗体反应系统(比如vidas.imx与axsy系统)用于病原微生物 的检测分析.该类各系统 的灵敏度高.精密度高.样品量大(90个).检测范围广.可用于直接测定idpm 的种类仍太少.
2.4细菌毒力与致病岛 的检测检测细菌毒力(比如肠毒素)可用毒力模型(指器官培养.复层细胞组织培养)及分子生物学方法鉴定.近些年对致病岛 的研究较为活跃,已鉴定出肠道致病菌有30多个致病岛,例比如致病性大肠杆菌(pai-ⅰ,pai-ⅱ;lee,eaea),耶尔森菌(hp1,hms),沙门菌(spis系列).霍乱o1与o139(45kd基因群),幽门螺杆菌(caga,vaca)等.致病岛 的测定可用pcr,dna测序.mrna差异显示.随机引物pcr.酵母双杂交体系.噬菌表面展示系统[9].这些技术方法具有快速.灵敏.标本用量少,可用于临床实验检测.
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高血压病是老年人最常见疾病，但一般人常把高血压和高血压病混同起来，实际上这是两个不同的概念。
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